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通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

GENMED通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑是一種旨在通過有機溶劑萃取，必要時皂化處理，進而在高效液相色譜儀和紫外光譜下（294nm波長）檢測分析，分離出可溶性維生素E波峰，以定量測定樣品中α-生育酚的含量的權(quán)wei而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種油類、植物、蔬菜、食品、血液等樣品中維生素E的檢測（包括α、β、γ、δ形式）。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

維生素E（vitamin E），又稱為生育酚（tocophenol；TCP），是一種由各種甲基化的酚類構(gòu)成的有機化合物，為脂溶性抗氧化劑。維生素E分成8種形式：4種生育酚，4種生育三烯酚（Tocotrienols），分別有α、β、γ、δ。其中α-生育酚是維生素E中ju活性，也是常見代表，在食物添加劑的命名上標記為E307。成年人的建議日攝入用量是15毫克。維生素E在植物、藻類等合成，而不能在動物中產(chǎn)生。維生素E在麥類、素油、水果、果仁、魚、蔬菜等中含量豐富，包括棕櫚油、橄欖油、豆油、奶油花生等。維生素E具有預(yù)防自發(fā)流產(chǎn)、增強免疫功能、防止未飽和脂肪酸、低密度脂蛋白和細胞膜的氧化、清除自由基、預(yù)防冠心病等作用。維生素E缺乏將導(dǎo)致神經(jīng)性疾患，例如脊髓小腦性共濟失調(diào)（spinocerebellar ataxia）、肌病（myopathies）、貧血等。通過有機溶劑萃取，必要時進行皂化處理，排除脂類、蛋白和碳水化合物的干擾，進而在高效液相色譜儀和紫外光譜下（294nm波長）檢測分析，分離出可溶性維生素E波峰，以定量α-生育酚的含量。

產(chǎn)品內(nèi)容

GENMED處理液（Reagent A）       20毫升

GENMED皂化液（Reagent B）  20毫升

GENMED酸性液（Reagent C）       20毫升

GENMED萃取液（Reagent D）   100毫升

GENMED溶解液（Reagent E）       20毫升

GENMED流相液（Reagent F）      500毫升

GENMED標準液（Reagent G）    500微升

產(chǎn)品說明書      1份

保存方式

保存GENMED標準液（Reagent G）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，避免光照；試劑具有揮發(fā)性，注意密閉瓶蓋；GENMED皂化液（Reagent B）和GENMED酸性液（Reagent C）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于樣品處理和標準液配制的容器

15毫升錐形離心管：用于樣品處理的容器

（微型）臺式離心機：用于樣品處理

DOUNCE勻漿器：用于裂解樣品

恒溫水槽或培養(yǎng)箱：用于樣品反應(yīng)孵育和晾干

高效液相色譜儀（HPLC）：用于定量測定

實驗步驟

• 樣品準備 

1）固態(tài)樣品準備

• 秤取50毫克待測固態(tài)樣品  
• 移入到一個液氮凍存管
• 即刻放進液氮罐過夜
• 次日從液氮罐里取出，即刻（快速）碾碎組織成粉末（注意：切莫使樣品凍融）
• 加入500微升GENMED處理液（Reagent A）
• 全部轉(zhuǎn)移到DOUNCE勻漿器
• 用勻漿棒勻化組織（約80下）
• 全部轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上清液到15毫升錐形離心管
• 再加入500微升GENMED處理液（Reagent A）到含有沉淀顆粒的1.5毫升離心管中
• 渦旋震蕩1分鐘
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上清液合并到上述15毫升錐形離心管中（總量1毫升）
• （選擇步驟）加入1毫升GENMED皂化液（Reagent B）
• （選擇步驟）渦旋震蕩15秒
• （選擇步驟）放進70℃恒溫水槽孵育30分鐘，其間每隔10分鐘渦旋震蕩5秒一次
• （選擇步驟）置于冰槽里冷卻1分鐘
• （選擇步驟）加入1毫升GENMED酸性液（Reagent C），混勻
• 加入4毫升GENMED萃取液（Reagent D）
• 強力渦旋震蕩15秒
• 重復(fù)實驗步驟21二次
• 放進臺式離心機離心10分鐘，速度為1300g 
• 移取上層液相到新的15毫升錐形離心管
• 放進40℃干式培養(yǎng)箱晾干
• 加入500微升30℃預(yù)熱的GENMED溶解液（Reagent E），混勻
• 即刻進行高效液相色譜分析（注意：如果暫時保存，建議在4℃不超過48小時；-20℃不超過3月）

2）液態(tài)樣品準備

• 移取500微升待測液態(tài)樣品到1.5毫升離心管
• 加入500微升GENMED處理液（Reagent A） 
• 渦旋震蕩1分鐘
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上清液到15毫升錐形離心管中
• （選擇步驟）加入1毫升GENMED皂化液（Reagent B）
• （選擇步驟）渦旋震蕩15秒
• （選擇步驟）放進70℃恒溫水槽孵育30分鐘，其間每隔10分鐘渦旋震蕩5秒一次
• （選擇步驟）置于冰槽里冷卻1分鐘
• （選擇步驟）加入1毫升GENMED酸性液（Reagent C），混勻
• 加入4毫升GENMED萃取液（Reagent D）
• 強力渦旋震蕩15秒
• 重復(fù)實驗步驟12二次
• 放進臺式離心機離心10分鐘，速度為1300g 
• 移取上層液相到新的15毫升錐形離心管
• 放進40℃干式培養(yǎng)箱晾干
• 加入500微升30℃預(yù)熱的GENMED溶解液（Reagent E），混勻，避光
• 即刻進行高效液相色譜分析（注意：如果暫時保存，建議在4℃不超過48小時；-20℃不超過3月）

• 測定準備

• 開啟儀器預(yù)熱15分鐘
• 根據(jù)下表設(shè)置高效液相色譜儀（HPLC）參數(shù)

• 使用GENMED流相液（Reagent F）運行1次（30毫升），以達到色譜柱均衡和溫度穩(wěn)定

• 標準樣品配制

• 準備好5個1.5毫升離心管，標記為1至5號管
• 分別加入100微升GENMED溶解液（Reagent E）到1至5號管
• 移取100微升GENMED標準液（Reagent G）到1號管，混勻
• 小心移取100微升1號管稀釋的GENMED標準液（Reagent G）到2號管，混勻
• 小心移取100微升2號管稀釋的GENMED標準液（Reagent G）到3號管，混勻
• 小心移取100微升3號管稀釋的GENMED標準液（Reagent G）到4號管，混勻
• 將1至5號管放進冰槽里備用，避免光照；標準管濃度見下表

四、色譜分析

• 將上述配制的GENMED標準液（Reagent G）和待測樣品放進30℃培養(yǎng)箱預(yù)熱
• 每次（每個樣品）注射20微升
• 每次（每個樣品）運行10至20分鐘
• 獲得色譜波峰圖：波峰面積（peak area）或峰值，保存記錄
• 全部運行完成，使用適量的GENMED流相液（Reagent F）清洗色譜柱

五、計算含量

• 方法一：通過儀器中的軟件進行測算
• 方法二：構(gòu)建標準曲線：縱座標（Y軸）為波峰面積（peak area）；橫座標（X軸）為標準α-生育酚濃度（微克/毫升），根據(jù)標準曲線獲得樣品對應(yīng)α-生育酚濃度（微克/毫升）
• 方法三：公式計算（選擇單一濃度的標準液）

樣本α-生育酚濃度（微克/毫升）=【樣本波峰面積（peak area）X標準α-生育酚濃度】÷對應(yīng)標準α-生育酚濃度的波峰面積

注意事項

• 本產(chǎn)品為20次操作
• 本產(chǎn)品可以用于β、γ、δ-生育酚的檢測
• 本產(chǎn)品檢測范圍是0.3至50毫克/升
• 操作時，須戴手套
• 試劑具有揮發(fā)性，注意密閉瓶蓋或使用封口膜
• 如果樣品中脂類含量高，建議皂化處理
• GENMED皂化液（Reagent B）和GENMED酸性液（Reagent C）具有腐蝕性，注意操作安全
• 建議使用GENMED溶解液（Reagent E）作為陰性對照或作為基準線
• 色譜柱的異物殘留、氣泡產(chǎn)生、溫度未達均衡等將導(dǎo)致異常波峰、時間偏移等
• 用戶可以使用已知濃度的GENMED標準液（Reagent G）或醋酸生育酚作為內(nèi)參標準加入到樣品中，然后進行萃取，檢測回收率（recovery）
• α-生育酚的HPLC參考圖譜如下

• α-生育酚的出峰時間（retention）以用戶操作時，使用的GENMED標準液（Reagent G）實際出峰為準
• 用戶可以使用熒光檢測：激發(fā)波長290nm，散發(fā)波長330nm
• 本公司提供系列維生素檢測試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感

使用承諾

秉著“信譽至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后，應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴格的質(zhì)量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司聯(lián)系，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負責更換產(chǎn)品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔由此造成的損失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

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編號 名稱 規(guī)格

GMS19071.2.1 GENMED通用型維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒 20次

GMS19071.2.1A GENMED處理液（Reagent A）     100毫升

GMS19071.2.1B GENMED皂化液（Reagent B） 100毫升

GMS19071.2.1C GENMED酸性液（Reagent C）      100毫升

GMS19071.2.1D GENMED萃取液（Reagent D） 100毫升

GMS19071.2.1E GENMED溶解液（Reagent E） 100毫升

GMS19071.2.1F GENMED流相液（Reagent F） 500毫升

GMS19071.2.1G GENMED標準液（Reagent G）      10毫升

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